Cara Pembuatan Media VW (VACIN dan WENT) Untuk Eksplan Anggrek

CARA PEMBUATAN MEDIA VW (VACIN DAN WENT) UNTUK EKSPLAN ANGGREK

A.    VW RACIKAN

1.      Disiapkan komposisi media VW yang terdiri dari unsur : makro, mikro, vitamin, dan ZPT.

Bahan :    

Komposisi	Jumlah
(NH4)2SO4  (Unsur makro)	500  mg/L
Ca3(PO4)2  (Unsur makro)	200 mg/L
KNO3 (Unsur makro)	525  mg/L
MgSO.7H2O (Unsur makro)	250  mg/L
KH2PO4 (Unsur makro)	250  mg/L
Fe Tartrat (Unsur mikro)	28    mg/L
MnSO4.4H2O (Unsur mikro)	7,5   mg/L
Pepton (Vitamin)	2      g/L
Sukrosa	20    gr/L
Agar	12    gr/L
Air kelapa	150  mL/L
pH 5-6

2.   Unsur makro, mikro, dan vitamin ditakar secara tepat sesuai komposisi yang dibutukan kemudian dimasukkan ke dalam 150 ml air kelapa (telah disaring 3 kali).

3.      Ditambahkan gula.

4.   Ditambahkan aquades (secukupnya terlebih dahulu (sedikit saja)) diaduk hingga semua komposisi terlarut sempurna, dan atur pH menjadi 5,2 dengan penambahan HCl 1 N atau NaOH 1 N.

5.      Ditambahkan agar.

6.      Tepatkan larutan menjadi 1000 ml (1 L).

7.      Dipanaskan di atas hot plate dan diaduk hingga agar larut.

8.      Media dimasukkan ke dalam botol secukupnya

9.      Dilakukan sterilisasi dengan autoclave.

10.  Media telah bisa dipakai setelah dibiarkan seminggu untuk melihat apakah media terkontaminasi atau tidak.

B.     VW INSTANT

1.         Media bubuk instant disiapkan dengan takaran sesuai yang tertera pada kemasan bubuk media vw instan.

2.         Ditambahkan gula.

3.         Ditambahkan aquades (secukupnya terlebih dahulu (sedikit saja)) diaduk hingga semua komposisi terlarut sempurna, dan atur pH menjadi 5,2 dengan penambahan HCl 1 N atau NaOH 1 N.

4.         Ditambahkan agar.

5.         Tepatkan larutan menjadi 1000 ml (1 L).

6.         Dipanaskan di atas hot plate dan diaduk hingga agar larut.

7.         Media dimasukkan ke dalam botol secukupnya

8.         Dilakukan sterilisasi dengan autoclave.

9.      Media telah bisa dipakai setelah dibiarkan seminggu untuk melihat apakah media terkontaminasi atau tidak.

NB :

Sterilisasi medium kultur:

Metode autoclave :

Medium dalam botol kultur ditutup dengan alumunium foil atau penutup plastik dan di autoclave pada suhu 121⁰C tekanan 15 psi selama 90 menit dari waktu medium mencapai suhu yang diperlukan. Lamanya waktu setrilisasi tergantung pada volume medium yang disterilkan.

catatan: tekanan tidak boleh melebihi 20 psi karena akan menyebabkan dekomposisi karbohidrat dan komponen-komponen thermolabil lain dalam medium.

 

CARA STERILISASI ALAT

A.    Sterilisasi Botol

1.      Botol dicuci menggunakan sabun, kemudian dibilas.

2.      Kemudian botol direndam dalam larutan kloroks selama 25 menit.

3.      Botol yang telah direndam dalam larutan kloroks selama 25 menit, kemudian dicuci kembali menggunakan sabun, lalu dibilas.

4.      Botol dikeringkan.

5.      Setelah botol kering, botol disterilisasi dalam autoclave pada suhu 121⁰C tekanan 15 psi selama 90 menit.

B.     Sterilisasi Alat Logam dan Petridish

1.      Alat dicuci menggunakan sabun, kemudian dibilas.

2.      Kemudian alat direndam dalam larutan kloroks selama 25 menit.

3.      Alat yang telah direndam dalam larutan kloroks selama 25 menit, kemudian dicuci kembali menggunakan sabun, lalu dibilas.

4.      Alat dikeringkan.

5.      Alat yang telah kering, dibungkus menggunakan kertas

6.      Kemudian disterilisasi menggunakan oven dengan suhu 180⁰ C selama 15 menit.

Sumber : Divisi Kultur Jaringan Imagro